準備假孕母鼠 (養母)
將可育雌鼠與輸精管結紮後絕育的雄鼠交配，剌激雌鼠發生一系列妊娠變化而得到假孕母鼠作為受精卵轉基因後的養母。
實驗介紹:
顯微注射法 (microinjection) 是利用管尖極細 (0.1至0.5μm) 的玻璃微量注射針，將外源基因片段直接注射到原核期胚或培養的細胞中，然後藉由宿主基因組序列可能發生的重組、缺失、複製或易位等現象而使外源基因嵌入宿主的染色體內。這種技術的長處為任何DNA在原則上均可傳入任何種類的細胞內。此法已成功運用於包括小鼠、魚、大鼠、兔子及許多大型家畜，如牛、羊、豬等基因轉殖動物。
實驗步驟
- 1.
- 2.受精卵的準備可育雌鼠注射孕馬血清與絨毛膜促性腺激素 (HCG) 促使超排卵。處理後與可育雄鼠交配。次日從輸卵管內收集受精卵備用。
- 4.胚胎移植將已轉入基因的受精卵自背部植入假孕母鼠的輸卵管內，使胚胎在養母體內發育成熟。
- 5.對幼鼠的鑑定
- 幼鼠發生斷乳後自尾部提取 DNA: 與目的基因探針作分子雜交，鑑定外源基因是否整合，有整合的鼠稱為首建鼠 (founder)
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- 建立鼠系: 將帶有外源基因的小鼠與未經轉基因的小鼠交配、傳代後，後代有 50%機率帶有整合的基因供實驗用。也可將合適的組織進行細胞培養建立細胞系
- 自小鼠內臟提取 RNA: 與目的基因探針做分子雜交，比鑑定外源基因的表達和表達的組織特異性。表達產物可以測定活性的，也可直接自血液或組織測定活性蛋白質，常用的方法如酶聯免疫吸附試驗 (ELISA) 或放射免疫測定 (RIA) 等。亦可取胚胎進行分析。中國已有少數實驗室 (如中國醫學科學院基礎醫學研究所) 套用此法進行載脂蛋白 TGM 研究。
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