• 00:00 1.
    凍細胞
  • 00:11 2.
    加 2ml PBS Wash
  • 00:26 3.
    吸掉
  • 00:31 4.
    家 1ml Trypsin 把細胞切下來
  • 00:38 4.1
    直接加在 dish 底部
  • 00:46 4.2
    放到 37 度C incubator 5 分鐘
  • 00:54 5.
    在 tube 標註
  • 01:03 6.
    加入 2ml medium，mix 均勻
  • 01:15 7.
    把 medium + cell 裝到 15ml 離心管
  • 03:14 8.
    800ul cell + medium 家到 tube
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凍細胞
長度: 03:32, 瀏覽: 83, 最近修訂: 2019-08-22
目前已有很多的化學化合物曾被單獨或混合使用為冷凍保存菌種的抗凍劑，這些抗凍劑能控制冰晶的大小及形成速率，能緩和溶質的濃度的急速增高及增加細胞膜的水滲透性，並降低細胞內容物的凝結點，以利冷凍時細胞脫水的進行。
 
細胞深低溫保存的基本原理是：在－79C以下時，細胞內的酶活性均己停止，即代謝處於完全停止狀態，故可以長期保存。
 
更完整的資訊，請參考
 
 
影片來源:
YouTube 或做實驗時用手機錄影
 
做法:
學長姐教的時候，學習的人負責錄影，並於事後
  1. 整理錄影
    可以加字幕重點 (可以用 EverCam)，也可以移除聲音 (降低心理門檻) 或配上背景音樂
  2. 提出問題 (例如，影片中哪些看不懂，可以用文字補充在重點說明)
  3. 整理實驗步驟，與要特別注意的地方 (從影片中截圖、整理文字重點)
  4. 最後再由教的人負責確認
 
參考的流程:
  1. 透過重點文字 + 圖片的編輯，補足影片細節的不足
  2. 容易造成實驗失敗的地方 (過去曾發生的案例)，特別用紅色字標示
  3. 設計檢核清單，幫助新人實驗時可以有明確的指引 (建立工作時，複製檢核清單)
  4. 設計課程，將紅色的標示的重點，變成測驗題目
  5. 持續累積經驗，用 FAQ 將遇到的問題整理
重點
  1.  
    要用到的試劑：PBS、medium、Trypsin、cell dye、FBS、DMSO
  2.  
     
    實驗前的準備
  3. 1.
    解凍容器，把冰盒拿出來退冰
    目的:
    避免盒子太冰，細胞會瞬間凍壞
     
    要退冰多久?
    一定要退到室溫，建議至少提前 30 分鐘拿出來退冰比較保險
  4. 2.
    準備 PBS、medium、trypsin
    步驟:
    1. 準備 PBS、medium、trypsin
    2. 噴酒精消毒瓶子外圍 (避免污染)，用紙巾擦乾
    3. 放到工作台
    4. 鬆開瓶蓋 (方便單手操作，注意: 不可以將蓋子完全打開放旁邊，避免污染)
  5.  
     
    開始實驗
  6. 3.
    把原來的 medium 吸掉
    目的:
    1. 舊的培養液裡面有廢物和死細胞 (保證品質和避免污染)
    2. 要換成抗凍的培養液
     
    實驗步驟:
    1. 拿細胞
    2. 要換新的 tip，避免污染
    3. 把原來的 medium 吸到廢物桶
     
  7. 4.
    PBS wash，吸掉
    目的:
    將舊的 medium 和廢物洗乾淨
     
    實驗步驟:
    1. 吸取 3ml PBS
      552e93c6d3fb38155073f058f39f3c7b.png
    2. 沿著 dish 壁加入 (為了避免直接沖到細胞)
      60f4257cf45c1458e6f5ed6950ad2195.png
    3. 加入後，蓋上蓋子輕輕旋轉，使 PBS 充分 rinse 所有細胞
       
    4. 吸掉 PBS
      de762f72309d17449c789a713dda0f84.png
  8. 5.
    把細胞切下來
    實驗目的
    將細胞從 dish 上切下來
     
    實驗步驟
    1. 加 1 ml trypsin (直接「散佈」加在 dish 底部)
      b0a696ae0007be3bdb473e1a4e2ef5b9.png
       
    2. 旋轉 dish，確保細胞都有接觸到 trypsin
    3. 放 37oC incubator 5 min (注意不要放太久)
      c3770a1ac5440c5f53e33de41d863507.png
       
    4. 利用空檔標示凍細胞要用的 tubes
      e72aaa6e29a9d98da9bb0cc6d6b0291d.png
  9. 6.
    從 dish 中取出 cell
    1. 從 incubator 拿出剛剛的 dish
    2. 加 2 ml medium
    3. 沖一沖 dish，mix 均勻
      特別注意:
      dish 傾斜 + 來回沖、吸的動作，確保將 cell 沖下來
       
    4. 把 medium + cell 裝到 15ml 離心管
  10.  
     
    以下尚未編輯
  11. 7.
    低速離心5 min，吸掉上清液
  12. 8.
    加1 ml medium，數細胞，取約10^6個細胞
  13. 9.
    800 ul細胞+ 100 ul FBS加進凍細胞tube
  14.  
     
     
    cell+ medium + FBS + DMSO = 1ml
  15. 10.
    加100 ul DMSO (要避光)
  16. Tube放進冰盒，冰到 -80℃
檢核清單
上一篇 下一篇
    1. Q1.
      DMSO的作用是什麼?
    2. Q2.
      橡皮管怎麼裝比較不容易脫落?
    3. Q3.
      要過多久，開始記錄溫度、體積?
    4. Q4.
      如何控制餾出液以約每秒 1 滴的速度滴出?
    5. Q5.
      蒸餾瓶大小如何選擇?
    6. Q6.
      如何判斷冷卻水壓的高低?
    7. Q7.
      加熱包接上變壓器後，電壓應設定為多少?
    8. Q8.
      為何開了加熱器的加熱開關沒有作用?
    9. Q9.
      如何確保溫度計準確測量到溫度? 應該放在什麼高度?
    10. Q10.
      冷凝管的進水口、出水口如何分辨?
    11. Q11.
      如何確保 L 型管不會掉下來?
    • 00:00 1.
      凍細胞
    • 00:11 2.
      加 2ml PBS Wash
    • 00:26 3.
      吸掉
    • 00:31 4.
      家 1ml Trypsin 把細胞切下來
    • 00:38 4.1
      直接加在 dish 底部
    • 00:46 4.2
      放到 37 度C incubator 5 分鐘
    • 00:54 5.
      在 tube 標註
    • 01:03 6.
      加入 2ml medium，mix 均勻
    • 01:15 7.
      把 medium + cell 裝到 15ml 離心管
    • 03:14 8.
      800ul cell + medium 家到 tube
    位置
    1. 知識庫
    2. ...
    3. 實驗 SOP
    資料夾名稱
    實驗 SOP
    上傳者
    蘇德宙
    單位
    台灣數位學習科技
    建立
    2019-07-30 06:12:07
    最近修訂
    2019-08-22 06:40:32
    長度
    03:32
    引用
    1
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