將 lysis buffer 300μl（內含protinase inhibitor）加入放置於 4℃ 冰鎮之脊髓標本 Ependrof tube，並以 Microson 機器打碎及sonication標本成均質液體，再用超高速離心方法（4℃下以 65000 至 70000 rpm之速度，離心 35 分鐘）；其後分離出上清液與沉澱物，丟棄沉澱物，留下上清液。

將經校訂後取等體積與等蛋白質總量之標本（50或100μl），置入 sample collecting tubes 內，再加入同體積的 Tricine SDS sample buffer，於 95℃ 下加熱 15 分鐘後，於 4℃ 下離心（7000rpm），等待應用 loading 在 SDS-PAGE gel 上。

將30﹪Acrylamide solution 3.5ml，DDW 1.5ml，3M pH8.45 Tris –HCl 5ml，40﹪glycerol 5ml，10﹪Ammonium persulfate 75μl及TEMED 7.5μl混合均勻後；立即注入注膠器之玻璃板間，並於其上層注入100﹪酒精，使其表面平整，靜置至膠體硬化後，再將上層酒精倒出吸乾。

於分離膠體上層，迅速插入0.75mm，10 wells之comb，來製備樣品槽，之後靜置至膠體凝固。

小心將 comb 拔出，再將 sandwich clamp assemblies 放入電泳槽中，加入10X Tricine SDS / electrophoresis buffer（Tris base 121g，Tricine 179g，SDS 10g，add DDW to final 1000ml），觀察無洩漏情況後，即完成膠體與電泳槽之製備。