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    Western Blot - Semi-Dry transfer [Video from GeneTex]
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Western Blot - Semi-Dry transfer
Duration: 05:06, Browse: 728, Update: 2018-12-18
Keypoint
  1. 1.
    迴旋振盪器振盪
    轉印完成後,將 NC paper 置於3﹪Blot-Quick blocking solution 中,用迴旋振盪器振盪三十分鐘 blocking。
  2. 2.
    加入 COX-2 與 nNOS antibody
    加入初級抗體,用迴旋振盪器振盪作用二至三小時。
  3. 3.
    再次反應
    以 TTBS (Tris-Tween buffer saline) 強力振盪洗三次,每次八分鐘。
    再將 transfer membrane 置於3﹪Blot-Quick blocking solution 中,用迴旋振盪器振盪三十分鐘 blocking。
    再加入次級抗體 (1:500 polyclonal anti-rabbit IgG for COX-2,monoclonal anti-mouse IgG for nNOS),作用50分鐘。
  4. 4.
    強力振盪
    以 TTBS 強力振盪洗三次,每次八分鐘。
  5. 5.
    蔭乾 ~ 反應
    將 transfer membrane 夾起蔭乾,置入 chemiluminescence reagents(PerkinElmer Life Science;Western Lightning: Enhanced luminol reagent 1.5ml 配上Oxidizing reagent 1.5ml)作用 3 分鐘反應螢光。
  6. 6.
    觀察
    最後以 Kodak 之 X-ray 壓片,洗片後觀察結果。
  7. (僅模擬資料,資料來源: http://p5a2u2l6.pixnet.net/blog/post/30322139)
Checklist
Location
Folder name
western blot (西方點漬法)
Author
系統管理者
Department
台灣數位學習科技
Create
2018-12-18 09:16:05
Update
2018-12-18 14:59:46
Browse
728
Duration
05:06
Reference
1
Source
https://www.youtube.com/watch?v=krFKPwhiHJE&list=PL9MMxtqzXYVLy74oC1BiAIiRuNLDCd43u