Western Blot - Semi-Dry transfer | tms+ 知識 / 訓練

Western Blot - Semi-Dry transfer

Duration: 05:06, Browse: 2593, Last Updated: 2018-12-18

Keypoint

1.

迴旋振盪器振盪
轉印完成後，將 NC paper 置於3﹪Blot-Quick blocking solution 中，用迴旋振盪器振盪三十分鐘 blocking。
2.
加入 COX-2 與 nNOS antibody
加入初級抗體，用迴旋振盪器振盪作用二至三小時。
3.
再次反應
以 TTBS (Tris-Tween buffer saline) 強力振盪洗三次，每次八分鐘。

再將 transfer membrane 置於3﹪Blot-Quick blocking solution 中，用迴旋振盪器振盪三十分鐘 blocking。

再加入次級抗體 (1：500 polyclonal anti-rabbit IgG for COX-2，monoclonal anti-mouse IgG for nNOS)，作用50分鐘。
4.

強力振盪
以 TTBS 強力振盪洗三次，每次八分鐘。
5.

蔭乾 ~ 反應
將 transfer membrane 夾起蔭乾，置入 chemiluminescence reagents（PerkinElmer Life Science；Western Lightning: Enhanced luminol reagent 1.5ml 配上Oxidizing reagent 1.5ml）作用 3 分鐘反應螢光。
6.

觀察
最後以 Kodak 之 X-ray 壓片，洗片後觀察結果。
(僅模擬資料，資料來源: http://p5a2u2l6.pixnet.net/blog/post/30322139)